祖籍浙江杭州，1890年2月12日生於南京官宦之家。16歲成為基督徒，之後全家連僕役共五十五人都接受了基督信仰。

1931年冬天，患了嚴重的瘧疾，導致眼睛無法見光且行動不便，被困於暗室長達半世紀。1949年，五十九歲的蔡蘇娟隨瑪麗‧李曼遷往李曼故里——美國賓州蘭卡斯特城樂園鎮定居。

1953年，由她口述的自傳《暗室之后》出版。之後陸續出版《蔡蘇娟——暗室之后續集》、《暗室珍藏》等。1984年8月25日，病逝於美國賓州蘭卡斯特城醫院。